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貼壁細胞的有效傳代培養(yǎng)需要將它們從培養(yǎng)容器中分離出來。采用多種方法，每種方法適合不同的細胞類型和條件。選擇解離方法時，考慮細胞系的具體需求和實驗?zāi)繕酥陵P(guān)重要。定期監(jiān)測細胞活力，目標是在傳代培養(yǎng)時細胞活力超過 90%，這對于培養(yǎng)物的持續(xù)健康和生產(chǎn)力至關(guān)重要。以下是這些過程的概述：
程序 | 解離劑 | 典型應(yīng)用 |
機械抖落 | 通過搖動或移液輕輕或劇烈攪拌 | 用于松散貼壁或處于有絲分裂期的細胞。 |
機械刮削 | 物理工具，例如細胞刮刀 | 適用于蛋白酶敏感細胞，盡管它可能很苛刻并且具有潛在的破壞性。 |
酶處理 | 胰蛋白酶溶液 | 對于牢固粘附在培養(yǎng)容器上的細胞有效。 |
酶處理 | 胰蛋白酶+膠原酶 | 非常適合致密細胞培養(yǎng)或多層生長的細胞，特別是成纖維細胞。 |
酶處理 | 分散酶 | 可以去除完整片材中的表皮細胞，保持細胞間的連接。 |
酶處理 | TrypLE™ 酶 | 適用于牢固貼壁細胞的強解離選項，適用于需要非動物源試劑的實驗方案。 |
酶處理 | Accutase | 胰蛋白酶的溫和替代品，對多種細胞類型有效，包括干細胞和原代細胞。 |
酶處理 | 胰蛋白酶+EDTA | 用于通過螯合二價陽離子來增強細胞脫離、促進酶活性的組合。 |
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